MultiPCR 区域甲基化测序服务

内容简介

对于高通量目标基因/CpG 位点甲基化检测，需要灵活的靶向甲基化测序方案，其中基于亚硫酸盐多重 PCR (Multi-PCR)扩增子NGS技术, 能够满足到几十个到上百个基因/CpG 区域的检测, 具有高准确性、高通量、低成本、快周期的优势，广泛用于高通量候选基因的甲基化 Biomarker 筛选、EWAS筛选靶向位点的验证及临床转化应用。

技术原理

多重PCR扩增子NGS靶向DNA甲基化定量技术技术原理，首先通过重亚硫酸盐处理，甲基化的C被保护，而未甲基化的C则被修饰为U；其次通过基于多因素算法设计合成目标区域特异的DNA甲基化多重PCR扩增引物，分别以上述CT处理之后的DNA单链为模板进行目标区域的多重扩增，每个多重PCR反应体系中最多可以容纳100个片段，每个区域长度在100-250bp；再者通过磁珠纯化产物并根据不同反应体系的扩增产物扩增，通过第二轮带有测序接头的通用PCR引物进行扩增建库；最终将建库产物进行超高深度NGS测序，平均测序深度可达1000×以上，根据CpG site中非甲基化和甲基化对应的T和C碱基的测序reads数量进行单个5mC位点的甲基化程度统计。

技术流程